期刊简介

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  • 杂志名称:重庆医学杂志
  • 主管单位:重庆市卫生和计划生育委员会
  • 主办单位:重庆市卫生信息中心,重庆市医学会
  • 国际刊号:1671-8348
  • 国内刊号:50-1097/R
  • 出版周期:旬刊
期刊荣誉:中国科技论文统计源期刊期刊收录:CA 化学文摘(美), 剑桥科学文摘, 知网收录(中), 万方收录(中), 哥白尼索引(波兰), 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, 上海图书馆馆藏
重庆医学杂志2006年第18期

人趋化因子SLC在大肠杆菌中的表达与初步纯化

罗福康;沈大斌;郑红;顾涛

关键词:融合蛋白, 宿主菌, 蛋白纯化, 趋化因子, 大肠杆菌
摘要:目的 确立人趋化因子SLC在大肠杆菌中的表达条件和初步纯化条件.方法 将pET32a(+)/SLC分别转化大肠杆菌AD494(DE3)、BL21trxB(DE3) 、BL21trxB(DE3)plusS,选择佳宿主菌,优化诱导表达的条件,将大量表达的目的蛋白经金属离子亲和层析、除盐、肠激酶酶切、阳离子交换进行初步纯化.结果 pET32a(+)/SLC佳宿主菌为BL21trxB(DE3),优化的表达条件为37℃、1mmol/L IPTG诱导3h,SDS-PAGE分析可见,表达蛋白的大小约为30kd,占菌体总蛋白的50%以上,可溶性蛋白约占50%.用SLC多克隆抗体进行Western blot分析显示,在30kd处出现单一阳性条带,而对照的pET32a(+)/BL21trxB(DE3)诱导菌则无此反应.SLC经一系列纯化步骤得到初步纯化.结论 初步建立pET32a(+)/SLC在宿主菌BL21trxB(DE3)中表达和纯化的方法.